分光光度计是实验室常用的精密仪器,在医院中有着广泛的应用,主要用于测量溶液的浓度。分光光度计属于计量强制检定项目,检定周期应<1年。目前的检定规程为中华人民共和国国家计量检定规程“紫外、可见、近红外分光光度计检定规程”该规程对自动扫描型仪器的检定方法描述并不多,有些参数不可设置,在此介绍一些检定技巧。
分光光度计测量原理
分光光度计的基本测量原理是朗伯-比尔定律,意味着一定波长的单色光通过溶液时溶液对光的吸收度与溶液自身的浓度以及液层的厚度成正比。分光光度计通过光栅或棱镜来生成不同波长的单色光,通过待测溶液后,检测出射光的强度,再经过信号处理,即可得到溶液的吸光度或透射比。通常需测量其中的一项。由于其分光能力很强,其波长范围可以达到数个nm,甚至更窄,从而提高了分析的灵敏度、准确度和波长范围,使得分光光度计在化学分析中得到广泛的应用。
计量中的常见问题与使用技巧
波长准确度的对比设定值:波长准确度的测量在规程中指定了9种标准物质可供选择。由于滤光片使用方便,价格低廉,成为应用最广泛的标准物质。通常采用氧化钬滤光片,通过全波段扫描,找到其吸光度出现波谷的波长,然后与给定值进行比较,可得到波长示值误差的数值。需要说明的是,虽然氧化钬具有固定的参考波长,但在实际计算中应选用具有标准物质校准资格的机构校准的波长为准,并应定期进行校正。
滤光片标号的含义:测量杂散光时,需要用到波长分别为220 nm、360nm和420nm的截止滤光片。截止滤光片上印有编号,编号的数字×10即为标称测试波长。所以应选择22号、36号和42号截止滤光片。截止滤光片类似于一个高通滤波器,其截止波长应分别≥225 nm、365 nm和430nm。同理,干涉滤光片也是以编号数字×10作为标称峰值波长,中性滤光片以编号数字×10作为标称透射比。