自动扫描型分光光度计计量检定中若干问题的分析与对策（二）

    分光光度计是实验室常用的精密仪器，在医院中有着广泛的应用，主要用于测量溶液的浓度。分光光度计属于计量强制检定项目，检定周期应＜1年。目前的检定规程为中华人民共和国国家计量检定规程“紫外、可见、近红外分光光度计检定规程”该规程对自动扫描型仪器的检定方法描述并不多，有些参数不可设置，在此介绍一些检定技巧。

   吸收池配套性：分光光度计的吸收池是成对配套，分为玻璃和石英两种材质。由于玻璃吸收紫外光，其适用波长为400～2000nm；石英适用波长为180～3000 nm。按照检定规程，配对的吸收池透射比的差值≤0.5%。为保证其配套性，2个吸收池尽量同时使用，注意保养。使用时样品液应达到2/3的高度，且注意不要溢出。使用完后用蒸馏水清洗同样的次数，拭镜纸单向擦干。一般使用1年后吸收池的配套性会变差，应重新配对。

   基线平直度调整：基线平直度是指扫描透射比为100和0时基线倾斜或弯曲的程度。如果基线的平直性差，就会使样品的吸收光谱中各吸收峰之间的比值发生变化，给定性分析造成错误。导致基线不平直的主要原因是仪器的光学系统失调，两光束不平衡。如仪器受震动，光源位置变动等都会引起光学系统故障(基线平直度要以吸光度表示)。有些设备对基线平直非常敏感，容易超

出规程标准，因此在进行此项测量时要使机器充分预热，光谱带宽设为2 nm，并且在仪器遮光罩关闭后稳定2min后再进行波长扫描。

   光谱带宽调整：规程中对噪声、漂移、最小光谱带宽和基线平直度几个项目的测定需要调整光谱带宽。光谱带宽是由狭缝宽度决定，理论上，光栅型仪器当狭缝宽度小于衍射宽度时，光谱带宽由衍射宽度决定；当狭缝宽度大于衍射宽度时，光谱带宽由狭缝宽度决定。狭缝越小，得到的单色光越纯，但光的强度降低。目前有很多仪器为固定光谱带宽，而规程规定在测量时设置为2 nm，固定光谱带宽仪器可不设。事实上，当光谱带宽不能设置时，容易使光电流的噪声偏大。

   扫描速度选择：进行波长最大允许误差的测量时，需要对氧化钬滤光片进行波长扫描。为节省时间，设定波长范围只需包含所要同标准值对比的波峰波谷即可。首先要对照上一次的检测报告或仪器说明书明确仪器波长重复性，设置使采样间隔小于波长重复性的扫描速度。如果不能设定采样间隔，则应设定扫描速度＜120 nm/min。进行基线平直度测量时，全波段扫描的速度应选择采样间隔为1 nm的速度，若不能设置，则可选择400～800 nm/min。

   波长分段与仪器级别：在紫外、可见、近红外分光光度计检定规程中，增加了对仪器的工作波长及仪器性能级别的划分。其工作波长分为A段、B段和C段。仪器性能从高到低分为4个级别，即I级、II级、III级、IV级。仪器的每一项计量指标均应根据级别划分标准。因此，应对照规程在计量证书中给出每项指标在每个波段的仪器级别，以方便使用者对仪器性能有更好的判断。

   光学器件的维护与保养：光学器件忌灰尘和触摸，要保证使用环境的清洁，滤光片使用完后要及时放回暗盒中。如光学器件粘有少量灰尘，可用小功率吸尘器处理。当环境湿度过大或PM2.5含量过高，也会对测量准确度造成影响。分光光度计属于精密仪器应尽量避免搬动，以免造成光路的轻微改变，仪器不用时应关闭电源，延长其光源寿命。

   分光光度计的检定是一项科学、严谨和细致的工作。由于该仪器是光学精密仪器，测量结果极易受到湿度、灰尘、振动及霉斑等偶然因素的干扰，实践中要区分是分光光度计本身的问题还是偶然因素导致的误差等各种问题，严格遵守检定规程规定流程和检测环境的要求正确使用、保养仪器。同时，加强对使用人员的培训也是保证仪器正常运行、测量数据准确可靠的重要途径。