在检定紫外可见分光光度计的实践中,有较多以棱镜分光的仪器,在检定它们的透射比时,在被检的个别波长点出,如果不加入仪器所配置的滤色片,则有严重的偏低现象,如加入滤色片则有明显的提高,这种显然是由于杂散光引起的异常现象,过去人们一直因为按线性的检定规程检定时未能检出杂散光而被忽视,因此到目前为止还没有人对产生这种现象做认真仔细的分析。下面将做具体的分析,以供堵着有一个明确客观的认识。
理论推导:我们知道标准物质的透射比特性曲线,任何一个分光系统都无法获得单一波长的光,比色分析中所谓的单色光是指一定光谱带宽的光束,这事容易理解的,透射比的误差与杂散光成正比,当杂散光一定时,T值越大,误差表现的也越明显。
关于加入滤色片后光谱带宽变大的影响:为了除去杂散光,在实际检定过程中需要进行滤光,但加入滤光片后将减弱光强,对有些分光光度计就需要调大狭缝宽度来补偿光强的减弱,使空白值调到100%T,这样显然会增大光谱带宽,增大光谱带宽不会带来前文提及的异常现象。实践说明,加入滤色片后的测得值在透射比峰值处稍低些,但基本上无明显的变化,这与前文中的异常现象无关,排除了异常现象是由于加入滤色片后因带宽增加而带来透射比值提高的可能性。
杂散光波长的推测及杂散光含量的估算:标准溶液选择了235nm,257nm,313nm,350nm;紫外标准滤光片选取了270nm,293nm,350nm。主要讨论标准溶液的313nm和紫外标准滤光片的350nm处,因为这两点处透射率受杂散光影响时,透射率数值明显上偏差。测定值总是偏低的,因为这两点是极大值点,根据前述的理论推导这是不难理解的。但杂散光究竟是来自长波方向还是短波方向,按现行的单光束紫外可见分光光度计检定规程检定方法可以查出来自长波方向杂散光,但由于来自短波方向的杂散光则无法查出。在实际工作中,很多一起按现行规程检测出杂散光后透射比的异常现象仍然存在,这就说明了还有来自短波方向的杂散光。