对于分析工作者,要懂得仪器的日常维护和对主要技术指标的简易测试方法,要经常对仪器各项性能指标逐项进行检查、校正 ,进行维护和测试,以保证仪器工作在最佳状态。下面介绍紫外可见分光光度计的主要性能指标及其测试方法。
波长校正:由于波长误差可以使定量分析造成误差,可以使定性分析或结构分析判断错误,以致于得出错误结论,所以,在仪器安装完毕后要进行波长检查 ,在使用一般时间后也要进行检查和校正,保证仪器的最大灵敏度。波长的测试有粗测和细测,粗测方法是调仪器波长旋纽至580nm处,打开遮光板,在比色槽中光路经过处放一白纸条,观察是否有均匀的黄光。细测方法常用谱钕滤光片校正法,可用镨钕滤光片在529nm±1~2nm处有较好的吸收峰。在校正时,将仪器按要求预热,波长度盘置580nm处,T%调至最大,在比色杯处放一白纸条,观察是否有光强均匀、边缘无光晕或杂光的光斑,如不符合要求,可调节灯泡位置使其符合要求,是为波长校正的粗调。再把 灵敏度置于“1”(最低档), 波长度盘对准529nm,电表机械零点为零,在光路空白时调T%为100% T,并反复查零点和100%T稳定情况。将谱钕滤光片插入光路,慢慢旋转波长度盘,找到透光率最
低的一点,这一点即为波长529nm。检查波长度盘的指示值是不是529nm ,超出规定(±1nm)必须进行调整。
杂散光检查:杂散光是由于光学元件制造误差以及光学和机械零件表面的漫反射形成的。在吸光度测定中,杂散光是分析样品的非吸收光,随着样品浓度的增加,杂散光的影响也随之增大 ,将给分析结果带来一定的误差。因此,杂散光的大小也是仪器性能的一项重要指标。杂光的来源有:
1、仪器本身的原因 ,如单色器的设计、光源的光谱分布、光学原件的老化程度、波带宽度以及仪器内部的反射及散射等;
2、室内光线过强而漏入仪器,仪器暗室盖不严;
3、样品本身的原因,如样品有无荧光、样品的散射能力强弱等。
镨钕滤光片在 585nm处吸光度A最大,透光率T最小,所产生的透光与杂光成正比,因此可用其透光率表示杂光的大小。先用谱钕滤片校正波长,然后用黑纸片挡住比色杯光路之后调整0%T,再用空气做空白调100%T。插入谱钕滤光片,在585nm处测定,其测定值为杂光水平。