紫外可见分光光度计测试（二）

    分光光度计的精密度和准确度公认是比较高的,在实际工作中被广泛采用,很多分析方法已被制订成标准方法。分光光度法都可以发挥作用, 在有机分析中,紫外一可见光谱除可作定量分析外,在定性和结构分析方面,它可作为红外光谱。核磁共振、质谱等方法的辅助手段。

   新仪器在启用时,必须请计量部门进行全面检测。但在使用过程中,也要定期复检。对各项性能指标逐项进行检查、校正,记录下原始数据,建立起该仪器的技术档案,供定期维护、校正时查阅。下面逐项介绍一个紫外可见分光光度计的主要性能指标及其测试方法。

   波长重复性：用校正波长的标准样品,在同祥条件下,每隔一定时间(如1小时)重复测量某一吸收峰位置,求出各次测量值对平均值的相对偏差,相对偏差的平均值表示波长的重复性。

   吸光度准确性: 即测光精度, 是指仪器上测得的透光率或吸光度与真实值之间的偏差,该偏差越小,说明数据越准确可靠, 即测光精度就越高。

   检查测光精度通常是应用标准溶液法。用碱性络酸钾溶液检查测光精度，其方法是将分析纯的铬酸钾放入105摄氏度烘箱内烘2小时使其恒重。取出后放在干燥器中。冷却半小时，用分析天平城区0.45g铬酸钾，并加入0.05N的氢氧化钾溶液到1000ml。在25摄氏度用10mm的石英吸收池测定出吸光度。

   吸光度里复性: 在同样条件下对某一试样进行多次重复测量吸光度,求得各次测量值对平均值的偏差和偏差的平均值。、

   基线的祖定性和平直性: 基线稳定性是指不放置样品情况下,扫描100%T和O%T线时, 读数偏离的程度.基线平直性是指不放置样品时,扫描100%T和0%T,基线倾斜或弯曲的程度。光学系统失调,二光束不平衡是基线平直性不好的主要原因,仪器搬动受震,光源位置移动也会引起基线弯曲。

   光度线性范围: 仪器的光度线性范围,也就是仪器最佳工作范围。在此线性范围内测得的物质的吸光系数才是一个常数,老式的分光光度计的光度线性范围一般是在0.1-1.2( 吸光度)之间,现代的仪器远远超出了这个范围。

   光度线性范围的检查法是将物质(例如重铬酸钾等) 配成一系列不同的浓度,测定吸光度, 根据测得的吸光度计算吸光系数,以吸光度A为横坐标,相应的吸光系数为纵坐标绘制吸光系数一吸光度曲线,曲线上的平坦区域即为仪器的线性范围。

   分辨率: 紫外可见分光光度计的的分辨率是指仪器对于紧密相邻的峰(吸收或发射)可分辨的最小波长间隔。是衡量分光光度计性能的重要指标之一它是分光光度计质量的综合反映

。单色器渝出的单色的光潜纯度、强度以及检测器的光谱灵繁度等是影响仪器分讲率的主要因素。

   分辨率低有时会使相邻两峰不能分开,使定性分析或结构测定造成错误。分光光度法的定量分析的基础是比耳定律。严格说来,吸光度与浓度成线性关系只能对单色光而言。

单色性差就会使定量分析结果产生误差。对于双光束紫外及可见分光光度计在260nm处。仪器应能分辨波长间隔为0.3nm3 n m 的二条潜线，其检查法是:

   1、将仪器量程放在0-100%档

   2、强1-2滴苯液滴入1cm石英吸收池中，盖上盖子，放入样品室内。

   3、调节100%旋纽,使270nm处的透射率调到90-100%之间,然后扫描258.9nm的一组苯蒸气的吸收峰。

   4、在记录纸上观察258.9nm的分辨深度,如果A值大于8%,说明仪器分辨率优于0.3nm。